为什么要构建表达载体|

为什么要构建表达载体

得到大量的DNA，虽然PCR也可以，但PCR扩增有出错率、但你每做一次常规的PCR，而且每次都要重新提DNA和RNA才行，而且，PCR反应的试剂盒又不便宜，用PCR来制备大量DNA有点得不偿失。尽管构建克隆载体也存在操作复杂（相对于PCR），成功率不是极高，而且还要筛选，但一旦你重组成功并转入了大肠杆菌，你就可以保存了，你想什么时候用，摇个菌，就可以制备到大量的DNA。

测序需要。你想转表达，你首先得确定你扩增的目的片段是不是你要的，不要以为你设计了个特异性引物，然后跟你mark的长度就可以确定了，这也只是推测，在科学上不严谨。扩增出的基因片段保险起见或者经费允许，要拿去测序，而一般送测的序列都是构建到载体上的序列，克隆载体上一般也都带有测序引物，已确定这就是你要的那条序列。你要写论文必须要给人真凭实据。

基因表达载体构建步骤

操作步骤如下：

用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现缺口，露出黏性末端；

再用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端；

将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处；

再使碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键；

再加入适量的DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来，形成一个重组DNA分子。

构建基因表达载体的原因,构建基因表达载体的原因简述

构建基因表达载体的原因是因为如果没有表达载体，基因是无法进入目的细胞的，只需要记住在植入基因时构建载体即可。

表达载体是必须构造的，一般为质粒（小型环状DNA）。

如果没有表达载体你想要植入基因是不能实现的，先用限制性内切酶切开质粒，然后将基因插入，在用DNA连接酶连接上，记住连接酶和限制酶作用的部位是相同的。

然后植物的就用花粉管通道法，动物就用显微注射法，然后就等目的基因表达吧应该会产生所需的蛋白质等产物。

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