基因表达载体构建步骤
操作步骤如下：
用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现缺口，露出黏性末端；
再用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端；
将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处；
再使碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键；
再加入适量的DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来，形成一个重组DNA分子。
构建基因表达载体的原因,构建基因表达载体的原因简述
构建基因表达载体的原因是因为如果没有表达载体，基因是无法进入目的细胞的，只需要记住在植入基因时构建载体即可。
表达载体是必须构造的，一般为质粒（小型环状DNA）。
如果没有表达载体你想要植入基因是不能实现的，先用限制性内切酶切开质粒，然后将基因插入，在用DNA连接酶连接上，记住连接酶和限制酶作用的部位是相同的。
然后植物的就用花粉管通道法，动物就用显微注射法，然后就等目的基因表达吧应该会产生所需的蛋白质等产物。
如何构建一个基因的过表达载体
首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。
用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。
将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处，首先碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键。
再加入适量DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来，形成一个重组DNA分子。如人的胰岛素基因就是通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合，形成重组DNA分子。
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